З розвитком таких суміжних наук, як генетика, молекулярна біологія, хімія, а також зростанням технічного прогресу, сучасна медицина може похвалитися інноваційними методами діагностики різних захворювань людини. Вони відрізняються високою точністю результатів і безпекою проведення. Одним з таких способів виявлення проблем зі здоров`ям є імуноферментний аналіз. Він придбав широку популярність в останнє десятиліття і завоював репутацію високоефективного, надійного і безпечного для пацієнта методу виявлення захворювань ще до появи зовнішніх симптомів. Ми є пояснимо, що представляє собою такий вид діагностики, який принцип його дії, відзначимо гідності, зазначимо в вартості такого аналізу.
Реакція організму на патогенну флору
Для того щоб зрозуміти, як, завдяки імуноферментного аналізу, лаборанти діагностують різні захворювання, необхідно розібратися в фізіологічному процесі, який відбувається в організмі під час зараження інфекціями. Коли патогенний мікроорганізм потрапляє в кровотік, імунна система людини демонструє захисну реакцію у вигляді виділення певних речовин - антитіл. Вони зв`язуються з кліткою і аналізують, чи є вона частиною організму або проникла ззовні. Якщо імунна система визначила, що клітина чужорідна, то кількість антитіл починає збільшуватися з метою боротьби з патогенним мікроорганізмом.
Антитіла бувають різних видів, мають свої особливості. Одні речовини з`являються безпосередньо в період інфікування, інші залишаються протягом усього життя в організмі людини і саме завдяки їм виробляється стійкий імунітет до конкретного захворювання. Рзделяют білкові структури на такі види: A, D, E, M, G. У медицині антитіла називають імуноглобулінами. Тому прийнято позначати показники цих речовин латинськими буквами Ig.
імуноферментний аналіз (ІФА) заснований саме на даних медичних знань. За допомогою спеціальних антигенів в лабораторних умовах можна визначити наявність або відсутність тих чи інших антитіл в біологічному матеріалі. За результатами такого аналізу лікар може поставити діагноз, а також визначити не тільки наявність патології, але і давність її походження, виявити рівень небезпеки для пацієнта. При иммуноферментном аналізі частіше інших досліджують наявність антитіл груп M і G.
Що являє собою ІФА?
Насправді імуноферментний аналіз не є інновацією сучасного суспільства. Його винайшли ще в 80-х роках. Але для проведення таких досліджень була потрібна громіздка дорога апаратура. Тому використовували такий метод тільки в спеціально оснащених наукових лабораторіях: його застосовували для типування клітин і тканин. А ось широкого поширення в діагностичній медицині він тоді не отримав, використовувати його було технічно складно і вкрай витратно. Лише з розвитком техніки і винаходом біополімерних матеріалів ІФА вдосконалили. Після чого метод став популяризується і завойовувати довіру в медичних колах.
Як вже було сказано вище, даний метод має на увазі виявлення в біоматеріалу - крові, навколоплідних водах, склоподібному тілі або спинномозкової рідини - певних груп імуноглобулінів.
Розрізняють дослідження без нанесення антигену на поверхню і твердофазного імуноферментного аналізу, який передбачає проведення реакції в спеціальних лунках. Останній метод має велику чутливість і надійність, тому саме таким чином проводять аналіз в медичних лабораторіях для виявлення захворювань людини.
Фази імуноферментного аналізу
Залежно від передбачуваного захворювання, з набору для імуноферментного аналізу використовують необхідний антиген, який під час хімічної реакції при наявності інфекції зв`яжеться з патогенною флорою. Цей процес називається проведенням імунної реакції.
Потім для того, щоб візуально визначити результат дослідження, проводять ферментативну фазу ІФА. Вона передбачає фарбування матеріалу за допомогою спеціальних реагентів. В даному дослідженні застосовують такі ферменти, як лужна фосфатаза, пероксидаза і авидин. Залежно від отриманого кольору в процесі проведення хімічних реакцій і визначають результат імуноферментного аналізу.
Що таке колориметрия?
Аналіз ферментативної фази діагностики проводиться за допомогою методу, який має назву "колориметрия". Справа в тому, що не тільки колір матеріалу дає інформацію про інфекції, але і вийшла в результаті хімічних реакцій щільність забарвлення. Саме цей показник визначає концентрацію патогенного мікроорганізму. Якщо по-старому використовують ручний метод діагностики, то для визначення зазначених показників вибудовують спеціальний калібрувальний графік.
У сучасних лабораторіях сьогодні рідко застосовують ручний метод. Для проведення аналізу ІФА використовують спеціальний апарат - колориметр, в якому вручну задаються лише параметри дослідження, а потім всю роботу, включаючи побудову графіка, прилад проводить автоматично.
методи ІФА
Розрізняють прямий і непрямий методи імуноферментного аналізу. Перший вид займає менше часу, так як має лише 3 стадії виконання. Спершу до антигенів досліджуваного матеріалу, поміщеним в спеціальні лунки, додають специфічні антитіла. Потім видаляють надлишковий їх кількість і проводять ферментативну фазу аналізу, отримуючи таким чином результат.
Непрямий метод застосовується набагато частіше, так як має більш високу чутливість в порівнянні з прямим способом діагностики. При його проведенні використовується подвійне дослідження. А саме - спочатку антиген пов`язують з немічених антитілом, а потім з міченим. Такий процес може тривати довше, але і результат є найбільш точним.
набори реагентів
Набори для імуноферментного аналізу випускають різні виробники, в самих різних комплектаціях. У Росії визнаною є компанія «Союз медико-біологічний». Даний виробник випускає набори реагентів для дослідження методом ІФА практично всіх поширених в наших широтах інфекцій, піддаються аналізу таким способом. Крім безпосередньо самих реагентів в комплекти входять додаткові матеріали, що забезпечує безпеку, зручність і швидкість виконання аналізу. Крім того, хімічні субстанції пофарбовані в різні кольори, що знижує ймовірність помилки у виборі реагенту лаборантом.
Відрізняються хіміко-біологічні набори відносною доступністю, що прямо впливає на поширення і доступність імуноферментного аналізу для населення.
Переваги методу діагностики
Безсумнівно, імуноферментний аналіз має ряд переваг в порівнянні з іншими діагностичними методиками:
- З його допомогою можна визначити навіть незначне наявність патогенних організмів, що говорить про високу чутливість тесту.
- Можливість виявлення захворювання на ранніх стадіях, що значно підвищує шанс на благополучне лікування.
- Простота і зручність взяття біологічного матеріалу. Такий аналіз проводять як в приватних лабораторіях, так і в державних. При необхідності матеріал може взяти медсестра у пацієнта вдома.
- Для аналізу потрібно зовсім незначний обсяг біоматеріалу.
- Швидке отримання результату. Сучасне медичне обладнання дозволяє виконати аналіз протягом доби.
- Можливість виявлення прихованих безсимптомних форм інфекції.
- Доступність дослідження.
- При необхідності можливе проведення масових обстежень даним методом.
- Існує можливість відстеження перебігу захворювання та ефективності призначеного лікування, так як можна проводити аналіз методом ІФА багаторазово абсолютно безпечно для пацієнта.
- Автоматизація етапів проведення аналізу, що виключає людський фактор і підвищує достовірність результатів.
- Реагенти для проведення ІФА можна зберігати досить довго - близько року.
- Проведення аналізу можливо при коливаннях температури навколишнього середовища.
Імуноглобуліни групи M
Антитіла групи М виробляються імунною системою відразу після виявлення чужорідного антигену. Отже, якщо імуноферментний аналіз завершився виявленням таких речовин в біоматеріалу, то це свідчить про гостру стадію протікання захворювання, первинному інфікуванні. Імуноглобуліни групи М можуть перебувати в організмі до місяця в залежності від виду зараження. Потім їх кількість зменшується до повного зникнення.
Імуноглобуліни групи G
На зміну імуноглобулінів групи М з`являються білкові структури виду G. Ці речовини виробляють стійкий, в більшості випадків довічний імунітет до захворювання. Визначення білкової структури IgG в досліджуваному матеріалі вказує на те, що організм раніше зустрічався з збудником і має захисну реакцію від повторного зараження.
Показання до діагностики
Імуноферментний аналіз крові застосовують для визначення різних інфекційних захворювань, гормональних станів, роблять алергопроби. А саме:
- визначають рівень гормонів щитовидної залози;
- показники репродуктивної гормональної панелі;
- онкомаркери;
- виявляють збудників інфекційних захворювань, таких як цитомегаловірус, гепатит, токсоплазма, краснуха, кір, туберкульоз, хламідія, сифіліс, мікоплазма, уреплазма, кандида, лямблії і навіть ВІЛ;
- діагностують аутоімунні захворювання. У тому числі часто використовують для дослідження гормонів щитовидної залози імуноферментний аналіз: ТТГ, ТГ, Т3 і Т4.
Крім діагностичних цілей, метод імуноферментного аналізу застосовують в науково-дослідній медичної діяльності.
Як проводиться забір матеріалу?
У більшості випадків для аналізу рекомендується паркан венозної крові. Після обробки та підготовки матеріалу для дослідження проводять імуноферментний аналіз сироватки крові або плазми.
Особливої уваги потребує дослідження гормональної панелі, так як в даному випадку вкрай важливо враховувати особливості забору матеріалу. Наприклад, діагностика більшості гормонів репродуктивної системи жінки вимагає взяття венозної крові в певні дні менструального циклу. На ряд інших гормонів діють зовнішні фактори: сезонність, час доби, психологічний стан пацієнта і багато іншого. Не враховуючи специфічні фактори, можна отримати помилковий результат, що призведе до загострення захворювання або неправильно призначеного лікування.
У деяких, частіше ускладнених випадках, для аналізу можуть знадобитися спинномозкова рідина, склоподібне тіло або навколоплідні води вагітної жінки. Процедури по забору цих біологічних матеріалів несуть певний ризик, мають протипоказання і відновний період. Тому слід проводити тільки за показаннями лікаря і під його професійним наглядом такої імуноферментний аналіз. Розшифровка в такому випадку вимагає спеціальних медичних знань і може зайняти деякий час.
Підготовка до аналізу
Імуноферментний аналіз слід проводити, дотримуючись всіх рекомендацій, так як на результати дослідження впливають зовнішні фактори. Наприклад, важливо здавати венозну кров натщесерце вранці (до 11 годин). За 2 тижні до передбачуваного забору матеріалу потрібно припинити прийом будь-яких лікарських препаратів, особливо гормональних. Кілька днів перед дослідженням слід утриматися від вживання алкоголю і жирної їжі, а також виключити фізичне навантаження, переживання і стреси.
розшифровка результатів
Розшифровка результатів імуноферментного аналізу вимагає спеціальних знань про особливості білкових структур (антитіл), про які йшлося вище (IgG і IgM). Відповідно до цих даних аналізують показники досліджень. У таблиці наведено варіанти, які можуть бути отримані при проведенні аналізу:
| імуноглобуліни M | імуноглобуліни G | передбачувана розшифровка |
| негативно | негативно | Організм ніколи не стикався з цією інфекцією. Немає ні збудника, ні антитіл до нього. |
| негативно | позитивно | Організм виробив стійкий імунітет до інфекції. |
| позитивно | негативно | Гостра форма інфікування. |
| позитивно | позитивно | Найімовірніше первинне зараження, але потрібні додаткові діагностичні дослідження. |
Аналізуючи представлену таблицю, можна зробити висновок, що в більшості випадків для підтвердження діагнозу потрібні додаткові дослідження. Не може дати однозначної відповіді один лише імуноферментний аналіз. Норма в даному випадку не має чітких меж: виявлені білки групи G вказують лише на те, що організм раніше піддавався інфікування визначеним збудником. Але цей же результат може говорити і про наявність гострої фази - важливо зіставити безліч чинників і показників для того, щоб поставити правильний діагноз.
Фактори ризику
ІФА є точним на 90%. Все ж існують фактори ризику, які впливають на спотворення результату діагностики: несправність апаратури, неправильний забір матеріалу, його зберігання і транспортування, неврахування інших зовнішніх факторів.
Не рекомендується проводити діагностику після переливання крові, гемолізу, хірургічних втручань, взяття біопсії або пункції біологічного матеріалу - це також може вплинути на результати показників.
вартість аналізу
Вартість діагностичного дослідження має великий діапазон і залежить від виду аналізу і визначається антигену, так як виходячи з цих факторів розраховується вартість реагентних наборів і визначається складність проведення аналізу. Але в більшості випадків є доступним багатьом пацієнтам імуноферментний аналіз. Ціна його становить від 300 р. до 2000 р.
ІФА - доступний, швидкий і ефективний метод діагностики великого переліку захворювань. Але розшифровкою результатів і постановкою діагнозу має право займатися тільки кваліфікований медичний працівник.
